光度計總兒茶素類含量測定

分光光度計總兒茶素類含量測定方法
矽新科技 技術服務部
壹、試劑配製:
一、 4﹪香草醛 Vanillin Solution: 
1. 秤取4g Vanillin(試藥級)將之溶解於100mL甲醇中,冷藏保存於褐色瓶中。
2. 未使用完的試藥,封蓋後儲存於乾燥恆溫的處所(防潮箱)。
 
二、 兒茶素 Catechin標準溶液: 
1. 精準秤取30mg(+)-Catechin(試藥級),以蒸餾水定量至100mL。
2. 以Catechin 溶液依不同比例配製成不同濃度標準液。
 
標準濃度Catechin 溶液(mL)蒸餾水(mL)
0.0030100
0.002482
0.001864
0.001246
0.000628
0.0000010
 
3. 未使用完的試藥,封蓋後儲存於乾燥恆溫的處所(防潮箱)。

 
貳、 校正曲線:(本步驟反應受光線影響,需作避光措施)
一、 取不同濃度標準液1mL置於試管中,並標示記號。
二、 各管加入5mL 4﹪香草醛溶液。
三、 各管以自動分注器,注入3mL 濃鹽酸,並充分混合。
四、 靜置15分鐘。
五、 以分光光度計測定其在波長500nm之吸光值,並記錄之。

 
參、 茶湯萃取:
一、 震盪水浴槽加水預熱至80℃,測量用之水銀溫度計需定時校驗。
二、 秤取1.0g茶葉置於250mL錐形瓶中,標示編號並記錄重量。
三、 錐形瓶中加入85℃熱水(蒸餾水or 逆滲透水)75mL、立即放入震盪水槽,水浴槽內水面高度需略高於錐形瓶內液面高度,以轉速80rpm、溫度80℃的條件萃取30分鐘,30分鐘後立即取出。
四、 將錐形瓶中茶湯以15mesh篩網過濾,並以少量RO水rines錐形瓶兩次,再以少量RO水rines篩網,避免殘留萃取液附著於瓶壁及篩網上影響檢測結果。
五、 濾液回複室溫後倒入100mL定量瓶中,加RO水定量至100mL,定量後倒入錐形瓶中封口備用,若不立即進行分析則需冷藏保存。
六、 茶湯檢測前需搖晃均勻且回複室溫,後以濾紙過濾茶湯待檢。
七、 分析時使用之檢測樣品,需以上述濾液進行。
八、 茶湯濃度計算: 
茶湯CONC.(﹪)=茶葉重量(g)×100=()﹪
最終定量體積(mL)


肆、 總兒茶素分析(本步驟反應受光線影響,需作避光措施)
一、 取茶湯濾液1mL,以10mL定量瓶加RO水定量至10mL。
二、 取1mL稀釋茶湯濾液,放入試管中。
三、 加入5mL 4﹪香草醛。
四、 以分注器加入濃鹽酸3mL,充分混合。
五、 於暗箱中靜置15分鐘。

 
伍、 儀器操作
一、 開啟Metertech SP-800系列可見光-分光光度計及印表機電源
二、 待分光光度計自我檢測完畢後,於鍵盤上輸入500,後按下 “ENTER” 完成波長設定。
三、 取RO水3mL注入比色皿,並將之放入比色槽中,按下 “Blank” 鍵,進行歸零。
四、 歸零完成後,進行檢測樣品吸光值讀取,並按下 “PRINT” 鍵進行紀錄。
五、 待檢驗完成後,經由校正曲線求出樣品兒茶素濃度。

 
陸、 檢測結果計算 
一、 校正曲線
1. 將標準品數據輸入軟體進行計算
2. 完成標準曲線後,檢視回歸曲線數值,若大於99.5﹪,則數據組不予採用,需重作標準曲線步驟,直到合乎標準為止。
 
二、 濃度計算
1. 將列印所得數據填入計算軟體內,計算總兒茶素濃度。
2. 最終依規定製作檢測報告。